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進(jìn)口elisa試劑盒如何進(jìn)行動(dòng)植物組織mRNA提取

點(diǎn)擊次數(shù):926 更新時(shí)間:2017-07-19
 

一、進(jìn)口elisa試劑材料 
水稻葉片或小鼠肝組織。 
二、設(shè)備 
研缽,冷凍臺(tái)式高速離心機(jī),低溫冰箱,冷凍真空干燥器,紫外檢測(cè)儀,電泳儀,電泳槽。
三、試劑 
1、無rna酶滅菌水:用將高溫烘烤的玻璃瓶(180℃ 2小時(shí))裝蒸餾水,然后加入0.01%的DEPC(體積/體積),處理過夜后高壓滅菌。 
2、75%乙醇:用DEPC處理水配制75%乙醇,(用高溫滅菌器皿配制),然后裝入高溫烘烤的玻璃瓶中,存放于低溫冰箱。 
3、1×層析柱加樣緩沖液;20mmol/L Tris·Cl(pH7.6),0.5mol/L NaCl,1mmol/L EDTA(pH8.0),0.1% SDS。
4、洗脫緩沖液:10mmol/L Tris·Cl (pH7.6),1mmol/L EDTA (pH8.0),0.05% SDS。
四、操作步驟 
(一)動(dòng)植物總RNA提取-Trizol法 
Trizol法適用于人類、動(dòng)物、植物、微生物的組織或培養(yǎng)細(xì)菌,樣品量從幾十毫克至幾克。用Trizol法提取的總RNA*蛋白和DNA污染。RNA可直接用于Northern斑點(diǎn)分析,斑點(diǎn)雜交, Poly(A)+分離,體外翻譯,RNase封阻分析和分子克隆。
1、將組織在液N中磨成粉末后,再以50-100mg組織加入1ml Trizol液研磨,注意樣品總體積不能超過所用Trizol體積的10%。 
2、研磨液室溫放置5分鐘,然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入,蓋緊離心管,用手劇烈搖蕩離心管15秒。 
3、進(jìn)口elisa試劑盒取上層水相于一新的離心管,按每mlTrizol液加0.5ml異丙醇的比例加入異丙醇,室溫放置10分鐘,12000g離心10分鐘。 
4、棄去上清液,按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇,渦旋混勻,4℃下7500g離心5分鐘。
5、小心棄去上清液,然后室溫或真空干燥5-10分鐘,注意不要干燥過分,否則會(huì)降低RNA的溶解度。然后將RNA溶于水中,必要時(shí)可55℃-60℃水溶 10分鐘。RNA可進(jìn)行mRNA分離,或貯存于70%乙醇并保存于-70℃。
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